Per rilevare la presenza di anticorpi contro N. caninum nel siero bovino, i controlli ei campioni di siero preparati vengono incubati in pozzetti rivestiti con antigene N. caninum (Ag). Gli anticorpi (Ab) specifici per N. caninum presenti nei campioni di siero positivi si legheranno all’Ag nei pozzetti. Dopo diversi lavaggi per eliminare le sostanze non legate, viene aggiunto un coniugato (un anticorpo accoppiato a un enzima) mirato all’anticorpo bovino. Dopo l’incubazione, l’eccesso di questo coniugato viene eliminato mediante un secondo lavaggio e il suo legame viene rivelato con un substrato cromogeno. Il coniugato, se presente, reagisce con il substrato e si sviluppa una colorazione verde. La reazione viene quindi arrestata e vengono lette le densità ottiche. L’intensità del colore consente la determinazione dello stato del campione testato. Un campione negativo mostrerà una reazione debole (verde chiaro) mentre un campione fortemente positivo mostrerà una reazione forte (verde scuro). Tutte le sfumature di verde tra scuro e pallido rappresentano vari gradi di positività.

Materiali forniti

• 2 x12 strip da 8 pozzetti rivestiti con N. caninum Ag
• 1 x 2,5 ml Controllo positivo pronto all’uso
• 1 x 2,5 ml Controllo negativo pronto all’uso
• 1 x 125 μl Coniugato concentrato
• 2 x 100 ml Soluzione di lavaggio concentrata (10X) (soluzione di arresto pronta all’uso)
• 1 x 30 ml 1 x 30 ml Substrato pronto all’uso

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Materiali richiesti ma non forniti:

• Acqua purificata
• Pipette regolabili monocanale e multicanale
• Puntali per pipette monouso
• Provette per la diluizione del campione
• Lettore di micropiastre ELISA a 96 pozzetti dotato di filtro da 405 nm
• Contenitori per la preparazione di soluzioni