Swinecheck HPS (Haemophilus parasuis)
Test immunoenzimatico per la rilevazione di anticorpi contro Haemophilus parasuis (HPS) nel siero suino indipendentemente dal sierotipo.
HPS è un organismo commensale del tratto respiratorio superiore dei suini. Finora sono stati identificati quindici diversi sierotipi. I sierotipi 1, 5, 10, 12, 13 e 14 sono i più virulenti. In condizioni appropriate i ceppi virulenti possono causare una grave malattia sistemica nota come malattia di Glässer. I segni clinici e le lesioni variano a seconda dello stato immunitario degli animali e della virulenza del ceppo. L’infezione sistemica di animali naïve con ceppi virulenti di HPS è caratterizzata da febbre alta, letargia, articolazioni gonfie, tosse, dispnea e segni del sistema nervoso centrale, come tremore e remare. La malattia di Glässer può essere controllata con antimicrobici e prevenuta con la vaccinazione. La diagnosi delle infezioni da HPS si basa sui segni clinici, sulle lesioni all’autopsia e sul rilevamento del microrganismo mediante isolamento o PCR. Il rilevamento degli anticorpi circolanti HPS può essere utile per diagnosticare l’infezione da HPS in animali che hanno mostrato segni clinici sospetti o per valutare i livelli di anticorpi di origine materna prima della vaccinazione o la risposta anticorpale dopo la vaccinazione.
I campioni di siero suino diluito e i controlli vengono incubati in pozzetti rivestiti con antigeni HPS (Ag) (colonne dispari) e in pozzetti senza Ag (colonne pari). Gli anticorpi (Ab) specifici per HPS presenti nei campioni di siero positivi si legano all’Ag nei pozzetti. Dopo diversi lavaggi per eliminare le sostanze non legate, viene aggiunto un coniugato (un anticorpo accoppiato a un enzima) mirato all’anticorpo suino. Dopo l’incubazione, l’eccesso di questo coniugato viene eliminato mediante un secondo lavaggio e il suo legame viene rivelato con un substrato cromogeno. Dopo questa incubazione, l’enzima, se presente, reagisce con il substrato e si sviluppa una colorazione verde. La reazione viene quindi arrestata e vengono lette le densità ottiche. L’intensità del colore consente la determinazione dello stato del campione testato. Un campione negativo mostrerà una reazione debole (verde chiaro) mentre un campione fortemente positivo mostrerà una reazione forte (verde scuro). Tutte le sfumature di verde tra scuro e pallido rappresentano vari gradi di positività.
Materiale fornito nel kit
- 12 strisce da 8 pozzetti rivestiti con HPS Ag
- 12 strisce da 8 pozzetti senza HPS Ag utilizzate come controllo (adesivo blu)
- 1 x 2 ml Controllo positivo pronto all’uso
- 1 x 2 ml Controllo negativo pronto all’uso
- 1 x 50 μL Coniugato concentrato
- 2 x 100 ml Soluzione di lavaggio concentrata 10X
- 1 x 30 ml Substrato pronto all’uso
- 1 x 30 ml Soluzione d’arresto pronta all’uso
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Materiali richiesti ma non forniti
- Acqua purificata
- Micropipette regolabili monocanale e multicanale
- Puntali per micropipette monouso
- Lavatore per micropiastre ELISA
- Provette per la diluizione del campione
- Lettore di micropiastre ELISA a 96 pozzetti dotato di filtro da 405 nm
- Contenitori per la diluizione di altre soluzioni
