I controlli e i campioni di siero porcino diluito vengono incubati in pozzetti rivestiti con antigeni PEDV (Ag). Gli anticorpi (Ab) specifici per PEDV presenti nei campioni positivi si legano all’Ag nei pozzetti. Dopo diversi lavaggi per eliminare le sostanze non legate, vengono aggiunti anticorpi policlonali biotinilati mirati alle immunoglobuline suine G (IgG) (coniugato A). Dopo l’incubazione, il materiale non legato viene eliminato mediante diversi lavaggi e viene aggiunta la streptavidina coniugata alla perossidasi di rafano (HRPO) (coniugato B). Dopo l’incubazione, l’eccesso di coniugato viene eliminato mediante diversi lavaggi e viene aggiunto un substrato cronogeno (TMB). Durante l’incubazione del substrato, l’HRPO, se presente, reagisce con il substrato e si sviluppa una colorazione blu. La reazione viene quindi arrestata (il colore cambia da blu a giallo) e vengono lette le densità ottiche (OD). L’intensità del colore consente di determinare lo stato del campione testato. Un campione negativo mostrerà una reazione debole (giallo pallido) mentre un campione fortemente positivo mostrerà una reazione forte (giallo scuro). Tutte le sfumature di giallo tra scuro e pallido rappresentano vari gradi di positività.

Materiali forniti:

• 2 x 6 strisce da 16 pozzetti rivestiti con antigene PEDV
• 1 x 2,5 ml Controllo positivo pronto all’uso
• 1 x 2,5 ml Controllo negativo pronto all’uso
• 1 x 100-300 µl Coniugato concentrato A
• 1 x 500-1000 µl Coniugato concentrato B
• 3 x 100 ml Tampone di diluizione pronto all’uso
• 2 x 100 ml Soluzione di lavaggio concentrata (10X)
• 1 x 25 ml Substrato pronto all’uso
• 1 x 25 ml Soluzione bloccante pronta all’uso

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Materiali richiesti ma non forniti:

• Acqua purificata
• Micropipette regolabili monocanale e multicanale
• Puntali per micropipette monouso
• Provette per la diluizione del campione
• Contenitori per la diluizione di altre soluzioni
• Lavatore per micropiastre ELISA (opzionale)
• Lettore di micropiastre ELISA a 96 pozzetti dotato di filtro da 450 nm